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BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本制品是基于BCA(Bicinchoninic Acid)法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu²⁺络合生成络合物，同时将Cu²⁺还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物。在562nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒专为低蛋白浓度样品的蛋白定量而设计，可精确测定浓度为2.5～200μg/mL的蛋白溶液，试剂盒的灵敏性高，平行性好，不同种蛋白之间的测量差异极低。本试剂同多种非离子型去污剂有较好的相容性。

• 稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
  

  管号	稀释液用量(μl)	标准品用量(μl)	最终浓度(μg/ml)
  A	360	40	200
  B	400	100(从A管中取)	40
  C	250	250(从B管中取)	20
  D	250	250(从C管中取)	10
  E	250	250(从D管中取)	5
  F	250	250(从E管中取)	2.5
  G	250	0	0(空白)

  
  
• 配制Micro BCA测试工作液：根据标准品和样品的数量配制测试液。
  试剂MD配制：4 volume MC + 100 volume MB
  测试工作液WR配制：1 volume MA + 1 volume MD
  充分混匀后待用。
  
• 试管及微板检测(蛋白浓度检测范围：2.5～200μg/mL)
  
  • 按上表准备好标准品及待测样品。
    
  • 将蛋白样品和测试工作液WR按照1:1(体积比)比例充分混匀。在60℃孵育60分钟。建议：标准96孔微孔板测试以300μL/孔为最佳。
    
  • 孵育完成后冷却到室温，在562nm处读取吸光度值。
    
  • 标准品与待测样品的吸光度值要扣除空白对照的吸光度值，然后进行浓度的计算。
    
  • 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。